توضیحات تفصیلی از فرار معرف در آزمایش های PCR

توضیحات مفصل در مورد فرار از معرف در آزمایش های PCR.

در آزمایش PCR ، پس از افزودن سیستم واکنش ، ما درب را با دقت می پوشانیم و به طور مکرر تأیید می کنیم که درب بسته است تا از فرار معرف جلوگیری شود. اما گاهی اوقات ما نیز شک داریم: ما تأیید کرده ایم که درب آن کاملاً بسته است ، اما پس از اتمام آزمایش ، معرف هنوز تبخیر می شود. دلیل ش چیه؟

در حقیقت ، فرار معرف یکی از شایع ترین مشکلات در آزمایش های PCR است و عوامل زیادی وجود دارد که بر فرار معرف تأثیر می گذارد.

تبخیر به این امر اشاره دارد که در طول آزمایش PCR ، محلول واکنش در دمای بالا تبخیر می شود ، و سپس بر روی دیوار بطری یا پوشش بالا متراکم می شود تا غبار آب یا قطرات آب را تشکیل دهد ، یا مستقیماً از شکاف هوا درپوش بطری یا فیلم سرریز شود و نتیجه آن باشد. در تغییر غلظت محلول واکنش. تغییرات ، میزان محلول واکنش کاهش یافته و برخی حتی به خشکی تبخیر می شوند و در نتیجه آزمایش های نامعتبر ایجاد می شوند.

1. فشار درب گرم ، دما

در آزمایش های PCR ، ما معمولاً درب را گرم می کنیم تا از چگالش بخار معرف جلوگیری شود. دمای درب گرم شده معمولاً بالاتر از محلول واکنش برای جلوگیری از تراکم بخارات است.

درب های گرمایش چرخه حرارتی را می توان تقریباً به چهار نوع زیر تقسیم کرد: درب های گرمایش غیر قابل تنظیم ، درب های گرمایش قابل تنظیم ، درب های گرمایشی سازگار و درب های گرمایش خودکار. درب گرم شده قابل تنظیم دارای فشرده سازی انگشت محکم است. اگر محکم محکم نشود ، معرفها تبخیر می شوند. تبخیر لبه را می توان با افزایش فشار روی درب گرم شده به حداقل برساند. گاهی اوقات بیش از حد می تواند لوله را خرد کرده و دستگیره را پیچانده کند. در شرایط عادی ، پوشش گرمایش هوشمند برقی می تواند به طور خودکار مواد مصرفی از ارتفاعات مختلف را تشخیص دهد ، به طور خودکار مواد مصرفی را فشرده می کند ، و فشار یکنواخت و ثابت است ، در نتیجه باعث کاهش تبخیر معرف و خطاهای دستی و بهبود دقت و تکرار آزمایشی می شود.

2. تغییر شکل مواد مصرفی

برای نشت بخار ، اکثر مردم فکر می کنند که فشار درب گرم کافی نیست. فشار درب گرم بسیار مهم است ، اما این تنها یک جنبه است. در حقیقت ، مواد مصرفی نیز بسیار مهم هستند.

صفحات دهانه PCR معمولاً از مواد پلاستیکی ساخته می شوند که پس از گرم شدن بسیار گسترش و تغییر شکل می یابد. میزان انبساط حرارتی پایه فلزی PCR که برای قرار دادن صفحه دهانه PCR استفاده می شود بسیار کم است و صفحه دهانه PCR نمی تواند به طور عادی در طول هواپیما پس از انبساط حرارتی گسترش یابد. حالت برآمدگی باعث می شود که پوشش گرمای بالا نتواند به طور کامل با سطح صفحه دهانه PCR تماس بگیرد و در نتیجه درجه حرارت و فشار ناهموار ایجاد شود و باعث تبخیر معرف در لبه صفحه دهانه PCR شود و بر اثر تشخیص PCR تأثیر بگذارد.

3. مواد مصرفی محکم بسته نمی شوند

سفتی درب حرارتی و مواد مصرفی به این معنی نیست که درپوش لوله PCR کاملاً بسته است و کیفیت صفحه چاه PCR ناهموار است. مواد مصرفی با کیفیت بالا ، سطح نازل و پوشش صاف است و مهر و موم پشت پوشش جعبه خوب است و نشت آن آسان نیست. مواد مصرفی تحتانی دارای لکه های ناهموار و خطوط شعاعی هستند که به راحتی می توانند باعث نشت یا حتی خشک شدن شوند.

بنابراین ، در آزمایش های PCR ، سعی کنید مواد مصرفی با کیفیت بالا و مناسب را انتخاب کنید. در عین حال ، سیستم واکنش می تواند گسترش یابد تا تأثیر تبخیر سیستم بر واکنش به حداقل برسد.