مشکلات آب بندی و آلودگی در صفحات کشت سلول چندگانه

بارگیری و رسیدگی به صفحات کشت سلول چند چاه:

صفحه کشت سلولی همچنین هنگام انجام عملیات سلولی از اصل ASEPSIS سختگیرانه پیروی می کند. کلیه عملیات باید استاندارد و علمی باشد و تأثیر بیشتری در رشد سلول ایجاد نمی کند. شایع ترین مشکل نحوه اطمینان از یکنواختی سلول ها پس از اضافه کردن نمونه و به حداقل رساندن تأثیر تغییر محیط بر وضعیت رشد سلول ها است.

پرسیدن:
درپوش های صفحات کشت 96 و 24 چاه یا ظروف پتری بسیار سست است که برای تهویه مناسب است ، اما آیا باکتری ها ، قالب ها و سایر آلاینده ها نیز در آن می لغزد؟

پاسخ:
درب بسیار گشاد است ، که متعلق به فرهنگ نیمه باز است و هدف از این امر تهویه است (در واقع ، این است که CO2 را در خارج از ظرف کشت به طور کامل با ظرف کشت مبادله کرده و ارزش pH فرهنگ را حفظ کنید. متوسط).
همه چیز مزایا و معایبی دارد که البته احتمال آلودگی را افزایش می دهد. علاوه بر این ، این باعث می شود مایع موجود در ظرف تبخیر شود ، که برای دوز دقیق داروها قابل توجه است. بنابراین ، دو اقدامات زیر ضروری است: الف. هوا در انکوباتور باید تمیز باشد (نور منظم ماوراء بنفش ، شستشوی الکل ، و انکوباتور باید تا حد امکان باز و بسته شود) b. رطوبت موجود در انکوباتور همیشه باید در 100 ٪ نگه داشته شود (سینک با آب مقطر استریل که در انکوباتور قرار دارد).
دقیقاً مانند یک ظرف پتری ، همچنین یک ظرف با یک درب وارونه است و آلوده نخواهد شد. عمدتا به دلیل فشار منفی جریان هوا ناشی از لبه "L" پوشش ، میکروارگانیسم هایی وجود دارد که به گرد و غبار وصل شده اند و گرد و غبار منتقل شده توسط جریان هوا نمی تواند از لبه پوشش که فشار منفی ایجاد می کند عبور کند. اثر تهویه فقط از طریق انتشار هوا انجام می شود و هیچ جریان هوا ایجاد نمی شود ، بنابراین فقط نفس می کشد و باکتری ها نفوذ نمی کند.

پرسیدن:
با استفاده از یک صفحه 24 چاه ، در برخی از چاه ها (در نیمکت فوق العاده تمیز) عملیاتی وجود دارد ، و سلول هایی وجود دارد که در چاه های دیگر کشت داده می شوند. من نگران این هستم که این باعث آلودگی شود. من نمی دانم به چه چیزی توجه کنم؟

پاسخ:
اگر عمل در نیمکت فوق العاده تمیز استاندارد باشد ، باید خوب باشد. من فکر می کنم شما می توانید از پوشش صفحه کشت کامل استفاده کنید ، سعی کنید فقط سوراخ هایی را که باید در آن عمل کنید ، در معرض دید قرار دهید و سوراخ های دیگر را با پوشش بپوشانید.
قبل از استفاده جامع را در نظر بگیرید و از همه سوراخ ها استفاده کامل کنید. اگر فقط نیاز به استفاده از چند سوراخ دارید ، می توانید فقط از یک طرف استفاده کنید و بقیه را با یک پوشش بپوشانید. من ابتدا به استفاده از سوراخ سمت راست عادت کرده ام (اضافه کردن نمونه ها به دست راست).

هنگام کار ، از چند اسلاید شیشه ای برای بالا بردن یک طرف تخته استفاده کنید ، پوشش را به طور کامل باز نکنید ، به طور کلی مشکلی نیست.
توزیع سلول و راه حل های ناهموار

پرسیدن:
سلول ها در صفحه کشت تلقیح می شوند و سلول ها همیشه در قسمت محیطی جمع می شوند ، چگونه می توان با آن مقابله کرد؟

پاسخ:
ممکن است بپرسم سلولهای شما چگونه مخلوط می شوند؟ آیا این صفحه را لوله می کند یا می لرزد؟ اگر این دومی باشد ، و اگر در یک دایره متزلزل شود ، بسیار محتمل است که سلول ها به دلیل نیروی گریز از مرکز به قسمت محیطی پرتاب شوند و در نتیجه سلولهای کمتری در وسط قرار بگیرند. بیش از چهار هفته!
در اینجا یک روش خوب وجود دارد: قبل از کشت صفحه بذر ، صفحه کشت را برای چند ساعت اشباع در انکوباتور قرار دهید و سپس آن را بیرون بیاورید. نیرو باید هنگام کاشت سلول ها سبک باشد. افزودن به آرامی اجازه می دهد تا سیستم تعلیق سلول به درون چاه های صفحه جاری شود و سلولهای کشت شده اساساً به طور مساوی رشد می کنند. به یاد داشته باشید که هرگز با یک شاکر تکان نزنید ، یا سلول های شما همانطور که گفتید با هم جمع می شوند.
هرچه قطر سوراخ صفحه کشت کوچکتر باشد ، این پدیده آشکارتر است. این پدیده برای صفحات 24 و 96 چاه اجتناب ناپذیر است ، زیرا مایع به دیوار می چسبد به طوری که محلول کشت در چاه سطح مایع را تشکیل نمی دهد ، اما حاشیه ای زیاد است ، درست مانند یک آینه مقعر. با این حال ، هنگام استفاده از این دو نوع صفحات دهانه ، به دلیل نیاز به مداخله اضافی امکان اضافه کردن مقدار کافی از محلول کشت وجود ندارد ، به طوری که سلول ها به همراه محلول کشت "جمع آوری لبه" ظاهر می شوند. این بستگی به این دارد که چه شاخص هایی را برای مشاهده نیاز دارید. اگر MTT باشد ، ایمونوهیستوشیمی به دلیل لایه بندی سلول بر نتایج تأثیر می گذارد.
هنگام هضم سلول ها ، برای جلوگیری از توده های سلول به طور مساوی به پیپتینگ توجه کنید و میزان محلول کشت در چاه باید کافی باشد. به طور کلی ، هنگام تلقیح ، محلول کشت کافی را اضافه کنید و هنگام اضافه کردن مداخله ، یک بار محلول را تغییر دهید. میزان محلول کشت اضافه شده به محلول مداخله برابر با میزان محلول کشت در زمان تلقیح است ، در این حالت ، پدیده "مجموعه لبه" بهبود می یابد ، بنابراین ممکن است شما نیز آن را امتحان کنید.

پرسیدن:
کاری که من انجام دادم آزمایش تشکیل پلاک بود. بهتر است سلول ها را در یک لایه یکنواخت پخش کنید. هنگام تلقیح ویروس ، بیشتر سوراخ ها خوب هستند و برخی از آنها یکنواخت نیستند. تفاوت های زیادی در گروه سلولی وجود دارد. من می خواهم از شما بپرسم هنگام اضافه کردن سلول از چه روشی استفاده می کنید؟

پاسخ:
برای پیپت سلول ها به یک سیستم تعلیق تک سلولی پس از هضم بسیار مهم است! اطمینان حاصل کنید که هنگام تقسیم صفحه ، تعداد سلول های هر چاه سازگار است!
البته عوامل پردازش نیز وجود دارد. موازی سازی بین چاه ها نیز بسیار مهم است. به عنوان مثال ، هنگام اضافه کردن دارو ، دارو را بعد از رقت مخلوط کنید تا اطمینان حاصل شود که غلظت هر چاه سازگار است!
علاوه بر این ، هنگام افزودن سلول ها و داروها ، گروه آزمایش و گروه کنترل باید به نوبه خود اضافه شوند تا از تفاوت چگالی سلول و غلظت دارو ناشی از توالی اضافه کردن نمونه ها جلوگیری شود!

پرسیدن:
دمیدن در حال حاضر یکنواخت است ، اما تخته ، 6 سوراخ و 24 سوراخ همیشه تا حدودی ناهموار و کمی در وسط متمرکز است. علاوه بر این ، بدیهی است که شمارش انجام می شود ، و پس از یک یا دو روز ، چگالی هر سوراخ متفاوت است که این امر بر تشخیص تأثیر می گذارد. آیا راه خوبی وجود دارد؟

پاسخ:
اگر از پیپت پاستور استفاده می کنید ، هر بار زیاد زیاد مکیدید ، زیرا سلولهای موجود در پیپت به طور خودکار غرق می شوند ، اغلب تعداد سلول های چند سوراخ اول بزرگ است ، و تعلیق سلول اغلب یکنواخت است و مایع اراده خواهد بود مسیر S شکل را دنبال کنید.
اگر از پیپت استفاده می کنید ، برای جلوگیری از آسیب رساندن به سلول ها ، نکات باید پردازش و حذف شوند ، به طوری که هر بار که مایع گرفته می شود با یک چاه مطابقت دارد. اضافه کردن سوراخ یک به یک با نوک دقیق تر است. بلکه به مخلوط تعلیق نیز توجه کنید.

برای راه اندازی یک گروه موازی ، N باید به اندازه کافی بزرگ باشد (می توانید آن را محاسبه کنید).

بعد از آبکاری تکان ندهید ، زیرا لرزش باعث می شود سلول ها به سمت مرکز جمع شوند. بهتر است یک بار تخته سنگ بزنید.

صفحه کشت سلولهای متخلخل یونگوی پزشکی همواره کنترل کیفیت را به عنوان زندگی شرکت در نظر گرفته و بهبود مستمر رقابت شرکت را دنبال می کند. این شرکت همیشه به روحیه سازمانی پیروی از قوانین و مقررات ، سختگیرانه بودن با نظم و انضباط خود ، ملایم بودن و جرات اینکه مسئولیت را به عنوان استاندارد در عملکرد ، حفظ و گسترش بازار با کیفیت عالی و خدمات عالی و دیدار با آن پیروی کند ، پیروی می کند. نیازهای مشتریان به بیشترین میزان. بشر برنده با مشتریان هدف توسعه ما است. یونگوی پزشکی! شریک قابل اعتماد شما ما مایل به همکاری صادقانه با شما هستیم تا آینده ای بهتر را ایجاد کنیم.